基于數據庫的仿制藥生物實驗研究
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1文獻檢索
計算機檢索CNKI數據庫、萬方數據庫和維普數據庫，檢索字段為“關鍵詞:生物等效”，檢索來源為“中國學術期刊網絡出版總庫”，發表時間為2016年3月至2018年8月。剔除宏觀分析類、政策解讀類、組織管理類文獻和重復發表的文獻，納入統計的涉及具體品種的研究專論共53篇［4－56］。
2生物等效性試驗設計方面
2.1受試者及例數
與2005年頒布的《化學藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術指導原則》［57］(以下簡稱2005版《指導原則》)相比，2016版《指導原則》明確了BE試驗需有適當比例的男女受試者，對于受試者沒有例數要求，但明確指出入選受試者的例數應滿足BE評價具有足夠的統計學效力的要求，即根據已有的參比制劑的q、CV%值和把握度等參數來設定例數。文獻中適應證為男女人群的50個BE試驗中只有4個試驗選取了部分健康女性受試者，其余的均只選擇健康男性受試者或未寫明性別。對于部分抗腫瘤藥物或精神類藥物，出于安全性考慮，美國FDA建議申請人招募病程穩定、并在BE研究期間接受治療的目標患者。如甲磺酸伊馬替尼片，FDA個藥指導原則［58］中建議受試者為已經接受穩定劑量伊馬替尼的癌癥患者，但EMA個藥指導原則［59］中受試者為健康人群，我國發表的文獻及備案的甲磺酸伊馬替尼片BE試驗中，有用健康受試者也有用患者的。文獻中受試者例數在16～50例，對于高變異的藥物，應考慮增加試驗的樣本量。如伏立康唑片，個體內變異大，研究者采用48例健康受試者。只有2018年發表的3篇文獻對把握度進行了驗算，以說明試驗選取的受試者例數符合統計學要求。
2.2餐后生物等效性
餐后BE研究不應忽視。2016版《指導原則》明確寫明“對于僅能與食物同服的口服常釋制劑，除了空腹服用可能有嚴重安全性方面風險的情況外，均建議進行空腹和餐后兩種條件下的BE試驗。如有資料充分說明空腹服藥可能有嚴重安全性風險，則僅需進行餐后BE試驗”。食物對生物利用度影響的研究目前在國內尚未引起足夠的重視，在需要進行空腹和餐后BE試驗的50篇文獻中，有3篇未注明受試者空腹或餐后狀態，其余只有9篇文獻開展了空腹和餐后兩種條件下的BE實驗。
2.3參比制劑的選擇
我國為指導仿制藥質量與療效一致性評價工作的開展，CFDA了《普通口服固體制劑參比制劑選擇和確定指導原則》［59］，其中明確了參比制劑選擇的3個原則:首選國內上市的原研藥品，其次選擇在國內上市國際公認的同種藥物，如果上述2種藥品均未在國內上市，也可選擇在歐盟、美國、日本上市并被列為參比制劑的藥品。截至2018年10月我國已17批參比制劑目錄。所有文獻中有39個品種的參比制劑選擇符合原則要求，5個品種選擇了國內已上市其他廠家生產的同一品種作為參比制劑;9個品種選擇了同一品種的其他劑型作為參比制劑，另有2篇文獻未寫明所選擇的參比制劑名稱、廠家、批號等信息。
3生物樣本測定方法
3.1生物樣本測定方法
目前國內外大多采用液質聯用法(LC－MS/MS)測定血藥濃度。在檢索到的57篇文獻中，除1個品種使用肝素ATⅩa因子顯色法測定人血漿中低分子量肝素的濃度外，有14個品種選用HPLC法，其余均用HPLC－MS/MS法測定血藥濃度，特異性和靈敏度更高，分析速度更快，檢測所需血漿樣本體積小。文獻多以蛋白沉淀法對血漿樣本進行前處理，前處理過程簡單，所得基質效應較低，更適用于臨床大樣本量快速分析。有11篇文獻未寫明測定采用的內標物質，失去作為科研論著的參考價值。
3.2生物樣本測定方法學考察
2015版《中華人民共和國藥典》和2016版《指導原則》對開展BE試驗需要進行的方法學研究內容進行了詳細的要求。為了保證分析方法可靠，必須進行充分的方法確證，一般應進行特異性、標準曲線和定量范圍、定量下限、精密度與準確度、樣品穩定性、提取回收率等幾方面的考察，但仍有10篇文獻未提及所進行的方法學研究，文獻中方法學研究內容存在的問題有以下幾點。樣品的穩定性考察不完善由于BE試驗樣本從采樣到檢測的周期通常需要幾周至幾個月，在其貯存期間目標藥物的穩定性需經考察驗證。指南中要求應考察:樣本室溫放置穩定性，短期、長期貯存穩定性，凍融穩定性，制備后穩定性，對照液和內標液的穩定性等。但有些試驗設計不完善，如長期穩定性的考察時間不夠，未能覆蓋從第1個樣本采集至最后1個樣本分析的時間周期;僅考察1個濃度樣品的穩定性;未考察內標液的穩定性等。未進行基質效應研究用免疫法及LC－MS/MS法等測定方法時，均應對基質效應的研究情況進行說明。比如用LC－MS/MS分析，特別是電噴霧離子化(ESI)方式時基質效應通常比較明顯，優化樣品前處理過程、提高色譜分離效果可減少基質效應。所有文獻中只有9篇對基質效應的研究。其他部分文獻研究了特殊基質條件下，加入定量下限和定量上限水平的分析物進行測定，以考察方法學的選擇性。部分文獻考察了稀釋可靠性。部分文獻考察了殘留效應，通過檢查第2周期給藥前血漿濃度，來直接確定殘留的可能性。另有部分文獻還進行了樣品再分析(ISR)，在方法驗證中使用校正標樣和質控樣品可能無法模擬實際試驗樣品，通過在不同天后，在另外一個分析批中重新分析試驗樣品，來評價實際樣品測定的準確度。
4BE的判定標準
BE試驗結果的統計分析，主要是用藥代動力學參數AUC和Cmax經對數轉換后以多因素方差分析(ANOVA)進行顯著性檢驗，然后用其幾何均值進行雙側和單側t檢驗以及計算90%置信區間的方法來評價和判斷制劑間的BE。在生物利用度試驗中，采用多因素方差分析進行統計分析，以判斷藥物制劑間、個體間、周期間和服藥順序間的差異。所有文獻中有16篇文獻未進行差異分析。目前我國BE判定標準已經與FDA和EMA一致，均采用的等效性范圍是受試制劑與參比制劑AUC和Cmax幾何均值比的90%置信區間均應在80%～125%。有11篇文獻未寫明參比和受試制劑幾何均值比的90%置信區間。
5其他需要關注的問題
有部分文獻未提及試驗過程中的藥物不良反應觀察結果，部分文獻中參與統計計算的人數少于入組人數且未說明脫落的原因。一些促胰島素分泌反應的降糖藥，有可能在給藥30min內發生低血糖等藥物不良反應。有部分文獻參考FDA制定的BE研究指導原則，給予研究藥物時用20%葡萄糖240mL送服，并且服藥后的4h內，每15min給予20%葡萄糖水60mL，給藥后1，4h進行指血血糖檢測，這樣可以有效地避免或降低藥物不良反應的發生率。
作者：劉倩 南楠 薛晶 許鳴鏑 單位:中國食品藥品檢定研究院