宮頸癌組織中的miR-126研究
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【摘要】目的研究miR-126在宮頸癌組織中的表達并探討其臨床意義。方法收集宮頸癌組織標本78例。采用qRT-PCR技術檢測宮頸癌組織及癌旁正常宮頸組織中mir-126的表達情況，并分析miR-126在宮頸癌組織中的表達水平與宮頸癌患者臨床病理參數之間的關系。結果miR-126在宮頸癌組織中的表達相對于癌旁正常宮頸組織中的表達明顯下調(P<0.001)。miR-126在宮頸癌組織中的高表達率與宮頸癌患者的組織分化程度、淋巴結轉移以及臨床分期明顯相關，即miR-126在低分化組的高表達率明顯低于高中分化組(P=0.013)，在有淋巴結轉移組的高表達率明顯低于無淋巴結轉移組(P=0.005)，在Ⅲ~Ⅳ期組中的高表達率明顯低于Ⅰ~Ⅱ期(P=0.007)。而miR-126在宮頸癌組織中的高表達率在不同年齡、腫瘤大小、HPV感染患者組之間比較差異均無統計學意義(P>0.05)。結論miR-126可能參與宮頸癌的發生發展，檢測miR-126的在宮頸癌中的表達對預測宮頸癌的浸潤轉移具有重要意義。
【關鍵詞】MiR-126；宮頸癌；侵襲；轉移
microRNAs(miRNAs)是一類內源性、長度為18~25nt的單鏈，非編碼小RNA分子，通過與靶基因3'非編碼區結合，從而特異性調控靶基因的表達，發揮類似癌基因或抑癌基因的功能[1]。miRNAs是重要的調控因子，能調控細胞的增殖、分裂、分化、凋亡等過程。研究顯示miR-126在多種腫瘤中表達下調，并且類似于抑癌基因樣作用[2-4]。此外，miR-126在乳腺癌、成人T細胞白血病、結腸癌以及惡性間皮瘤中低表達，并且與患者的不良預后相關[5-7]。研究顯示miR-126在宮頸癌組織中的表達明顯低于正常宮頸組織，然而，目前尚無有關miR-126在宮頸癌中的臨床意義以及預后價值的研究報道。本次研究通過qRT-PCR技術檢測miR-126在宮頸癌組織與癌旁正常宮頸組織中的表達，探討miR-126與宮頸癌轉移、預后等之間的關系，為進一步揭示宮頸癌的發病機制以及尋找宮頸癌預后分子標志物提供實驗依據。
1資料與方法
1.1病例資料收集
2010年5月至2013年12月期間我院收治并確診為宮頸癌的患者78例，年齡26~72歲，平均(54±15)歲。所有宮頸癌患者術前均未行放化療等抗腫瘤治療。病理學分類按照宮頸癌FIGO分期標準。病理診斷結果經兩名以上病理學專家確診。所取正常宮頸組織距癌緣>5cm，HE染色證實為非癌組織。
1.2主要材料TRIZOLTMReagent購自invitro-gen公司；逆轉錄試劑盒購自Promega公司；qRT-PCRmiRNADetectionKit購自上海吉瑪公司。其余試劑均為國產分析純。
1.3qRT-PCR稱取每個宮頸癌標本和癌旁正常宮頸組織各適量，用液氮研磨法將上述各種組織磨成粉末，用Trizol法抽提組織中總RNA，并逆轉錄合成cDNA于-80°C保存備用。PCR擴增采用RealtimeqRTPCR實時定量試劑盒，擴增反應體系為20μl，其中包括TaqDNApolymerase(5U/μl)0.2μl，MiR-126primers(5μmol/L)0.4μl，2×SYBRMix10μl，miR-NA-126product2.0μl，滅菌蒸餾水7.4μl。循環體系為：95°C3min，95°C12s，62°C35s，72°C30s，一共40個循環。以U6為內參，所測定的miR-126的相對表達量采用2-ΔΔCT法分析。
1.4統計學方法
應用SPSS16.0軟件進行統計學處理，計數資料比較采用χ2檢驗或確切概率法，計量資料以均數±標準差(x-±s)表示，兩組間比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。
2結果
2.1宮頸癌組織中miR-126表達水平的檢測提取宮頸癌組織和癌旁正常宮頸組織中的總RNA，以U6snRNA為內參。采用qRT-PCR法檢測宮頸癌組織和癌旁正常宮頸組織中miR-126的表達水平。選取1例癌旁正常宮頸組織的miR-126的表達值為1，以2-△△Ct表示miR-126的表達水平，然后分析得到78例宮頸癌組織中miR-126的平均表達值為(0.703±0.036)，癌旁正常卵巢組織中miR-126的平均表達值為(1.526±0.065)，二者比較，差異具有統計學意義(P<0.001)。
2.2宮頸癌組織中miR-126表達水平和臨床病理參數的關系本次研究以宮頸癌組織中miR-126表達值的中位數為臨界值，miR-126的表達值大于或等于中位數為高表達，少于中位數為低表達。結果顯示，miR-126在78例宮頸癌患者中有51例低表達(65.38%)，27例高表達(34.62%)，差異有統計學意義(P<0.05)。經相關性分析發現，miR-126在宮頸癌組織中的高表達率與患者的性別、年齡、HPV感染、組織學類型以及腫瘤大小無顯著相關性(P>0.05)；而miR-126在宮頸癌組織中的高表達率與宮頸癌患者的組織分化程度、淋巴結轉移以及臨床分期明顯相關，即miR-126在低分化組的高表達率明顯低于高中分化組(P=0.013)，在有淋巴結轉移組的高表達率明顯低于無淋巴結轉移組(P=0.005)，在Ⅲ~Ⅳ期組中的高表達率明顯低于Ⅰ~Ⅱ期(P=0.007)。
3討論
宮頸癌的發生是一個多步驟的過程，包括從正常宮頸上皮出現內瘤變，再逐步轉化為侵襲性宮頸癌。近年來，由于婦科普查以及宮頸癌早期篩查的實施，宮頸癌的發病率呈上升趨勢，發病年齡也趨于年輕化。目前治療宮頸癌的標準方案為手術加放化療，但是不同患者的臨床結局存在顯著差異，并且也難以預測。因此，了解宮頸癌發生的病因、分子生物學以及遺傳學機制對患者的治療策略以及預后標記物的鑒別具有重要意義。最近大量研究顯示，miRNAs在多種腫瘤中異常表達，并且類似于癌基因或抑癌基因樣作用[8]。由于miRNAs在不同組織和疾病中的特異性表達模式以及廣泛的調控潛能，因此可作為診斷與預后生物標志物以及潛在的治療靶點[9]。研究顯示，miR-126在乳腺癌中表達下調，并且通過調控VEGF/PI3K/AKT信號通路參與乳腺癌的發生發展[10]。此外，miR-126在胃癌細胞中表達下調，其低表達與胃癌的臨床分期以及淋巴結轉移相關，并且通過靶向調控Crk在體內外抑制胃癌細胞的增殖與轉移[11]。Hamada等[12]研究顯示miR-126在胰腺癌細胞中表達下調，并且通過靶向ADAM9b抑制胰腺癌細胞的遷移與侵襲，并且還可誘導EMT轉化。上述研究均表明miR-126在多種腫瘤中發揮抑癌基因樣作用。Yu等[13]研究顯示miR-126在宮頸癌細胞中表達下調，能抑制宮頸癌細胞的增殖，并且還能增強腫瘤細胞對化療藥物博來霉素的敏感性。本次研究通過qRT-PCR法檢測了miR-126在78例宮頸癌組織及癌旁正常宮頸組織的表達，發現miR-126在宮頸癌組織的表達相對比癌旁正常宮頸組織明顯下調，經相關性分析發現miR-126在宮頸癌中的表達水平與宮頸癌患者的組織分化程度、臨床分期以及淋巴結轉移明顯相關。綜上所述，miR-126在宮頸癌組織中的表達下調，且miR-126的表達狀態與宮頸癌患者的腫瘤分化程度、臨床分期以及淋巴結轉移相關。這些結果均提示了miR-126可能參與宮頸癌的發生發展與轉移過程，為miR-126成為宮頸癌臨床預測生物標記物以及治療靶點提供了實驗證據。
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作者：龍丹 劉伏香 周艷 梁云香 單位：中國人民解放軍一六九醫院婦產科