醫學影像技術技能精選(九篇)

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第1篇：醫學影像技術技能范文

[關鍵詞] 自體輸血；異體輸血；胃癌；炎性因子；免疫功能

[中圖分類號] R5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2016）02（a）-0106-02

Effect of Autogeneic or Allogeneic Transfusion on Inflammatory Factor and Immunologic Function in Patients with Radical Operation for Carcinoma of Stomach

LUO Yun， WANG Hong-mei

Blood Transfusion Department， The people s Hospital of Taixing of Jiangsu Province， Taixing， Jiangsu Province，225400 China

[Abstract] Objective To research the effect of autogeneic or allogeneic transfusion on inflammatory factor and immunologic function in patients with radical operation for carcinoma of stomach. Methods 96 cases of early gastric cancer patients receiving the radical operation for carcinoma of stomach in our hospital from June 2012 to August 2014 were selected and randomly divided into the autogeneic group and the allogeneic group with 48 cases in each， the allogeneic group were transfused with allogeneic whole blood， the autogeneic group were transfused with autologous blood， the natural killer （NK cells）， proleulzin（IL-2）and T lymphocyte subsets level（CD3+、CD4+、CD4+/CD8+）of the two groups before and after operation were compared. Results The NK cells and IL-2 of the two groups at the same day after operation were obviously decreased compared with those before operation，（P

[Key words] Autogeneic transfusion； Allogeneic transfusion； Gastric cancer； Inflammatory factor； Immunologic function

胃癌是源于胃黏膜上皮細胞的惡性腫瘤，患者早期可無任何體征，中晚期常見上腹壓痛及腫塊，晚期患者會出現貧血、消瘦、營養不良甚至惡病質等表現[1-2]。由于胃癌的惡性程度較高，手術切除是根治早期胃癌的唯一方法[3]，該研究2012年6月―2014年8月臨床觀察96例在該院接受胃癌根治術的患者，旨在探討自體、異體輸血對患者炎性因子及免疫功能的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

整群抽選2012年6月―2014年8月就診于該院的早期胃癌患者96例，所有患者均經臨床診斷及X線、腹部超聲、胃鏡等相關檢查確診，且自愿在該院接受根治術治療，排除伴有心、肝、腎其他嚴重疾病及免疫性疾病者，排除精神、意識障礙不能配合研究者，排除有放、化療和激素治療史患者，排除不簽署知情同意書者。且該研究經該院倫理委員會審核批準。上述96例患者按照隨機法將其分為自體組（n=48）和異體組（n=48），自體組中男30例，女18例，年齡34～68歲，平均（46.5±6.2）歲；體重53～79 kg，平均（66.3±5.4）kg；異體組中男29例，女19例，年齡35～67歲，平均（47.2±7.1）歲；體重52～79 kg，平均（68.4±5.1）kg，兩組患者在基線資料方面比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

所有患者在該院接受根治性手術，術前明確腫瘤部位、大小，制定手術方案，上腹正中切口，探查清除后切除病胃、重建消化道，術畢。兩組患者麻醉、手術方式相同，異體組術中輸異體全血400～600 mL，自體組麻醉后術前經橈動脈放血400～600 mL，并靜脈輸入同等6%羥乙基淀粉（國藥準字H2006436），術畢將自體血輸回。

1.3 觀察指標

分別于術前、術后當天及術后7 d取患者清晨靜脈血，檢測自然殺傷細胞（NK細胞）、白介素-2（IL-2）及T淋巴細胞亞群（CD3+、CD4+、CD4+/CD8+）水平。

1.4 統計方法

采用SPSS 17.0統計學軟件分析研究數據，計量資料以均值±標準差（x±s）表示，行t檢驗，P

2 結果

2.1 炎性因子

術后當天兩組患者NK細胞、IL-2較術前顯著下降（P

表1 兩組患者手術前、后NK細胞及IL-2水平比較（x±s）

注：①與術前比較，P

2.2 疫功能指標比較

術后當天兩組T淋巴細胞亞群各指標均顯著下降（P

3 討論

早期胃癌行根治性切除術是目前唯一治愈手段，術后5年生存率達80%以上[4]。但腫瘤患者圍術期輸血對其預后及5年生存率具有一定的消極影響[5]。由于血液是多種成分組成的混合物，可與機體免疫系統發生相互作用，誘發受血者免疫功能抑制，促進腫瘤細胞的生長，使腫瘤復發[6]。

有研究[7]顯示圍術期胃癌患者輸注異體紅細胞會影響其細胞免疫功能。IL-2具有免疫增強作用，參與B細胞激活、增殖，輸血后T細胞產生IL-2減少，IL-2功能降低，B細胞激活和抗體產生減少、NK細胞功能不全，導致機體免疫功能抑制。因此，臨床應嚴格執行輸血標準，減少不必要的輸血。該研究中異體輸血組術后當天IL-2水平顯著下降，且明顯低于自體輸血組，術后7 d異體輸血組NK細胞水平也顯著低于自體輸血組。異體輸血對患者免疫功能影響較大。且自體組術后7 d T淋巴細胞亞群指標恢復到術前水平，而異體組CD3+（60.3±11.2）%、CD4+（30.4±6.2）%、CD4+/CD8+（0.88±0.25）顯著少于自體組。可見自體輸血1周后患者免疫功能漸漸恢復，而異體組則出現了較長時間免疫功能抑制。

綜上，胃癌患者自體輸血較異體輸血對患者免疫功能影響小，值得推廣。

[參考文獻]

[1] 洪金全，陳志遠，張進萍，等.圍術期異體紅細胞輸注對胃癌患者T細胞亞群的影響[J].中國輸血雜志，2014，27（12）：1299-1302.

[2] 陳超，陳騰，奉典旭，等.圍手術期輸血對老年胃癌術后近期影響及遠期復發率的影響[J].胃腸病學和肝病學雜志，2014，23（5）：517-519.

[3] 李衛，周鈴，李敏，等.圍手術期輸血對胃癌根治手術患者并發癥發生的影響[J].實用癌癥雜志，2015，30（7）：1065-1067.

[4] ，歐陽永忠，湯明，等.圍手術期輸血與胃癌根治術后并發癥的關系[J].中華醫學雜志，2014，94（10）：751-754.

[5] 李文靜，蔣學兵，王燕菊，等.輸血前不規則抗體篩查與臨床輸血安全[J].國際檢驗醫學雜志，2012，33（17）：2065-2066， 2068.

[6] 李嵐，孫彥.異體輸血對惡性腫瘤患者的影響[J].國際檢驗醫學雜志，2013，34（23）：3250-3251.

第2篇：醫學影像技術技能范文

關鍵詞：  海木； 小鼠； 學習記憶

海木Trichilia connaroides為楝科（Meliaceae）植物，別名老虎楝、雞波、鷓鴣花，在我國主要分布于廣西、云南、貴州［1］。民間用藥中，海木的根常被作為治療關節炎、咽喉炎、扁桃體炎和其他疾病的方藥［2］，有清熱解毒，祛風濕腰腿痛和心、胃氣痛等功效［3］。有研究報道，海木氯仿提取物對通過化學處理、熱處理和甲醛誘導處理的昆明小鼠和Wistar大鼠建立的炎癥模型，表現出顯著的依賴性止痛作用和抗炎活性［4］。關于海木影響學習記憶功能的研究，目前尚未有報道。本文以昆明小鼠為對象，探討海木提取物對學習記憶功能的作用。

1  材料與儀器

1.1  動物昆明小鼠300只，體質量為（25±5）g，雄性，清潔級，購于廣西醫科大學實驗動物中心。許可證號：SCXK桂2003-000。

1.2  藥物和試劑

海木枝葉于2009-03采于廣西桂林市永福縣壽城，經廣西植物研究所劉演研究員鑒定為楝科植物海木（Trichilia connaroides）。采后粉碎，60度烘干備用；75%消毒酒精、乙醇（分析純）、石油醚（分析純）、氯仿（分析純）均購于天津福晨化學試劑廠；正丁醇（分析純），購于上海申博化工有限公司；0.9﹪氯化鈉注射液（廣西南寧百會藥業集團有限公司，生產批號：0902003）；銀杏葉片（12×24s，桂林益佰漓江制藥有限公司，生產批號：090901）；鹽酸氯丙嗪注射液（50 mg∕2 ml，上海禾豐制藥有限公司，生產批號：080502）；亞硝酸鈉（北京益利精細化學品有限公司，生產批號：991116）；無水乙醇（分析純）（廣東光華化學廠有限公司，生產批號：20090115）。

1.3  儀器BA—200小鼠避暗儀，DT—200小鼠跳臺測試箱，MT—200Morris水迷宮視頻跟蹤分析系統，均由成都泰盟科技有限公司提供，RE—200旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠），SHZ—D（Ⅲ）循環水式真空泵（鞏儀市予華儀器有限責任公司），電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）等。

2  方法

2.1  海木萃取物的制備

稱取海木干枝葉適量，加入適量的無水乙醇，加熱回流2h，用四層紗布過濾，得到的上清液提取液，重復提取3次，合并提取液，減壓回收溶劑，得膏狀物，將此膏狀物用乙醇∶水=1∶3的比例除去葉綠素，回收溶劑至干，即得粗提部分。將所得粗提物分成兩份，一份備用，另一份依次用石油醚、氯仿、正丁醇、水進行固-液萃取，即得到石油醚部分、氯仿部分、正丁醇部分、水提部分。將各部分分別減壓回收溶劑至干，最后得到的膏狀物即是石油醚萃取物、氯仿萃取物、正丁醇萃取物和水提物。

2.2  動物分組在各項實驗分組之前均用相應的儀器對小鼠進行神經行為學測試和篩選，剔除與其他小鼠具有較大差異的，再將其余的小鼠隨機分組，每組10只。

2.3  海木對正常小鼠學習記憶功能作用的活性部位篩選（避暗法）將小鼠分為正常組、粗提物組、石油醚組、氯仿組、正丁醇組、水提物組和陽性對照組共7組。各給藥組按100 mg/kg劑量灌胃1 ml，正常對照組灌胃等容量的生理鹽水，陽性對照組按16 mg/kg劑量灌胃等容量銀杏葉片溶液，1次/d，連續給藥10 d，于給藥第9天進行避暗訓練，第10天給藥后30 min按文獻［5］方法測定小鼠在避暗儀中30 min內的錯誤次數（進入暗室受到電擊的次數）和潛伏期（每只小鼠放入明室從開始測試到第一次進入暗室的時間）。

2.4  海木氯仿萃取物對正常小鼠空間記憶功能的影響（Morris水迷宮法）將小鼠分為正常組、氯仿萃取物小、中、大劑量組和陽性對照組共5組。給藥組分別按50，100，150 mg/kg劑量灌胃海木氯仿萃取物1 ml，正常對照組灌胃等量生理鹽水，陽性對照組按16 mg/kg劑量灌胃等量銀杏葉片溶液，1次/d，連續給藥10 d。于給藥第5天進行1次定位航行訓練，于末次給藥后30 min按文獻［6］方法測定小鼠尋找平臺潛伏期及撤除平臺后經過原平臺的次數及在原平臺象限停留的時間。

2.5  海木氯仿萃取物對鹽酸氯丙嗪所致記憶獲得障礙小鼠的影響（避暗法）動物分組和給藥與“2.4”同，除正常對照組外，實驗小鼠于給藥第9天皮下注射鹽酸氯丙嗪注射液（4 mg/kg），30 min后進行避暗訓練，第10天末次給藥30 min后測定小鼠在避暗箱中30 min內的錯誤次數和潛伏期。

2.6  海木氯仿萃取物對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙小鼠的影響（跳臺法）動物分組和給藥與“2.4”同，除正常對照組外，實驗小鼠于給藥第9天進行跳臺訓練后立即皮下注射亞硝酸鈉水溶液（120 mg/kg），第10天末次給藥30 min后按文獻［5］方法測定小鼠在跳臺測試箱中30 min內的錯誤次數及潛伏期。

2.7  海木氯仿萃取物對乙醇所致記憶再現障礙小鼠的影響（跳臺法）動物分組和給藥與“2.4”同，實驗小鼠于給藥第9天進行跳臺訓練，第10天除正常對照組外，在末次給藥后灌胃40%乙醇（0.1 ml/10 g），30 min后測定小鼠在跳臺測試箱中30 min內的錯誤次數及潛伏期。

2.8  數據處理所有數據以±s表示,數據統計分析采用SPSS13.for windows統計軟件進行組間t檢驗和單因素方差分析比較組間差異，P＜0.05 為差異具有顯著性，P＜0.01為具有非常顯著性差異。

第3篇：醫學影像技術技能范文

摘　要：目的：探討地黃飲子對AD鼠學習記憶及膽堿能損害的影響。方法：模型組以D－乳糖(D－gal)腹腔注射合并β淀粉樣蛋白(Aβ)注射海馬制備AD動物模型，各治療組分別在造模的同時灌胃地黃飲子和執腦衰膠囊、哈伯因。運用穿梭箱檢測各組大鼠的學習記憶能力，采用生化法檢測備組大鼠腦勻漿AchE。免疫組化方法觀察SYN蛋白的變化。結果：中藥治療組均可使各組大鼠潛伏期降低、主動回避反應陽性率明顯升高。被動遺避時間顯著降低，表明主動、被動反應水平均有所回升，有顯著性差異。灌服中藥后各治療組腦組織AchE活性降低，大鼠海馬、皮層神經元SYN蛋白表達增加。結論：地黃飲子對癡呆鼠學習記憶能力的提高及改善神經元損傷的作用，可能與地黃飲子改善鼠腦神經元膽堿能損害，來上調海馬和皮層神經元SYN蛋白的表達有關。

關鍵詞：地黃飲子；老年性癡呆；p淀粉樣蛋白；乙酰膽堿酯酶；突觸素

中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1673－7717(2007)07－1370－03

老年性癡呆，亦稱阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種常見于老年人的神經退行性變性疾病。本實驗根據AD發病的β淀粉樣蛋白(AB)致病學說制備AD復合動物模型，觀察地黃飲子對AD大鼠膽堿能損害及突觸素的影響，旨在探討本方防治AD的作用機理。

1 實驗材料

1．1 實驗動物

健康Wistar雄性大鼠140只，普通級，重(2.60±20)g，黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供。

1．2 藥物與試劑

地黃飲子制備方法：醇、水提取液與揮發油提取液，離心、濃縮至適量。合并上述醇、水提液及揮發油制成含生藥lg/mL的濃縮液。抗腦衰膠囊由石家莊四藥股份有限公司生產(國藥準字Z13021850，生產批號040107)，配制成含生藥O.2403g/mL水溶液。哈伯因由河南竹林眾生制藥股份有限公司生產(國藥準字H10940156，生產批號040103)，配制成0.0018/L水溶液。試劑：D－半乳糖(D－gal)由上海華舜生物工程有限公司提供(批號707222)。A13t－40，Sigma公司提供(Lot：088K49512)。乙酰膽堿酯酶(AchE)檢測試劑盒由南京建成生物化學有限公司提供。突觸素(SYN，Synaptophysin)免疫組化試劑盒，由武漢博士德生物工程有限公司提供，PV二步法免疫組化試劑盒由北京中山生物技術有限公司提供。

1．3 主要實驗儀器

腦立體定位儀(NARISHIGE SN－2型日本)、大鼠穿梭程序控制儀(ZIL－2中國醫學科學院藥物研究所)、攝影顯微鏡(OLYMPUS日本)等。

2 實驗方法

2．1 分組方法

140只Wistar大鼠隨機分成7組：空白組，假損傷組，模型組，抗腦衰對照組(中藥對照組)，哈伯因對照組(西藥對照組)，中藥治療高、低劑量組，每組20只。

2．2 模型制備

假損傷組腹腔注射生理鹽水。余組均給予D－半乳糖[50mg/(kg?d)]腹腔注射4周，造成亞急性衰老；4周后再腦內注射凝聚態Aβ1-40。假損傷組注射生理鹽水1μL。其余各組均注射Aβ。

2．3 給藥方法

中藥治療組腹腔注射造模同時分別給予地黃飲子高、低劑量灌胃[相當含生藥5.4g/(kg?d)和2.7g/(kg?d)]，中、西對照組分別給予抗腦衰膠囊、哈伯因溶液灌胃[含生藥分別為2.403g/(kg?d)、0.018mg/(kg?d)]，余組灌胃等量蒸餾水，1次/天，共5周。

2．4 觀察指標

2．4．1 大鼠穿梭實驗操作方法，實驗分為訓練和正式測試兩部分，訓練期為3天；第4天測試記憶能力，記錄第4天的電擊次數、電擊時間和主動逃避時間。計算主動回避的陽性率[(循環次數一遭受電擊次數)/循環次數×100％]。

2．4．2 AchE測定行為學測試后大鼠斷頭取腦，制備腦勻漿，離心，取上清液。測定參照試劑盒說明書。

2．4．3 腦SYN蛋白表達檢測，行為學測試完畢，大鼠迅速處死取腦(去除小腦)，固定，修塊，標本選在注射部位后。透明，包埋，切片，采用免疫組化(PV二步法)檢測，光鏡下觀察鼠腦海馬及皮層神經元蛋白表達。滴加一抗(1：50比例稀釋)，滴加二抗(山羊抗小鼠)工作液，陰性對照為一抗加PBS。

2．5 數據處理

數據采用x±s表示，數據統計分析均在spss11.0軟件中進行，采用方差分析，多組間兩兩比較用LSD法。

3 實驗結果

3．1 地黃飲子對AD鼠穿梭箱試驗的影響結果見表1。

結果表明，模型組大鼠潛伏期延長、主動回避反應陽性率明顯降低，被動逃避時間顯著延長，與空白組、假損傷對照組有顯著差異(P＜0.01)，表明該造模方法可以使大鼠學習記憶獲得。各治療組均可使模型鼠潛伏期降低、主動回避反應陽性率明顯升高，被動逃避時間顯著降低，表明主動、被動反應水平均有所回升，有顯著性差異(P＜0.01)，說明地黃飲子各劑量組具有類似抗腦衰、哈伯因的作用，能夠提高癡呆鼠學習記憶能力。

3．2地黃飲子對AD鼠腦勻漿AchE的影響結果見表2。

結果表明，空白組與假損傷組比較無顯著性差異(P＞0.05)。造模可引起大鼠AchE活性異常升高，與空白組、假損傷對照組比較有顯著差異(P＜0.01)。而模型鼠在服用地黃飲子、抗腦衰膠囊、哈伯因后，可顯著抑制模型大鼠腦組織中的AchE活性(P＜0.01或P＜0.05)，其中哈伯因抑制Ache活性最為明顯(P＜0.01)，這與膽堿酯酶抑制劑類藥物已知的作用機制相符。

3．3 地黃飲子對AD鼠腦海馬和皮層SYN蛋白的影響

染色后在海馬區、皮層均可見彌漫性SYN棕黃色陽性表達，染色較深。結果采用CMIAS多功能真彩色病理圖象分析系統進行分析，計算陽性目標總面積與統計場總面積比值。統計分析結果見表3。結果顯示，造模損傷所致的SYN低表達經治療后，均有所提高，其中中高組、西藥對照組能明顯上調皮層及海馬SYN蛋白表達含量，與模型組相比具有顯著差異(P＜0.01)；而中藥對照組及中低組SYN含量也有所回升，與模型組比較有差異(P

第4篇：醫學影像技術技能范文

目的 觀察血管緊張素Ⅳ（AngⅣ）對糖尿病大鼠海馬膽堿乙酰轉移酶（ChAT）表達及認知功能的影響。方法 38只SD大鼠隨機分為正常對照組、糖尿病組和糖尿病+AngⅣ組，建立STZ糖尿病大鼠模型， Morris水迷宮測試大鼠學習和記憶能力，免疫組化觀察大鼠海馬ChAT的表達，RTPCR檢測ChAT mRNA水平的表達。結果 糖尿病+ AngⅣ組海馬chAT及其mRNA表達與糖尿病組相比明顯增高（P

【關鍵詞】 血管緊張素Ⅳ；膽堿乙酰轉移酶；認知功能

【Abstract】Objective To explore the effects of angiotensin Ⅳ on the expression of choline acetyltransferase (ChAT) and its mRNA in hippocampus and cognitive function of diabetic rats. Methods 38 SD male rats were pided into normal， diabetic model and angiotensin Ⅳ treatment groups randomly. Diabetes was induced by a single peritoneal injection of streptozotocin. 11 weeks later， learning and memory behaviors were investigated by a spatial version of Morris water maze test. The expression of ChAT of all rats was examined with immunohistochemical method and its mRNA expression was detected by RTPCR. Results Compared with diabetic model group， the changes of ChAT and its mRNA in hippocampus significantly increased in angiotensin Ⅳ treatment group（P＜0.05）. Meanwhile， learning and memory grade in angiotensin Ⅳ treatment group were better than those in diabetic model group（P＜0.05）. Conclusions Angiotensin Ⅳ could improve cognitive ability in diabetic rats by increasing the expression of ChAT and its mRNA levels.

【Key words】Angiotensin Ⅳ；Choline acetyltransferase；Cognition

有研究發現與認知功能有關的基底前腦、海馬等處的膽堿能神經元在糖尿病認知功能障礙早期就存在明顯退行性改變和代謝紊亂，ChAT表達減少〔1〕。膽堿乙酰轉移酶（ChAT）是乙酰膽堿合成過程中最重要的酶，是決定生物體內乙酰膽堿含量的關鍵因素。國外有研究者報道血管緊張素Ⅳ（AngⅣ）對認知功能有著重要的影響，但AngⅣ對膽堿能神經遞質表達以及糖尿病認知功能障礙的發病過程有無影響，目前尚未見報道。故本研究建立鏈脲佐菌素（STZ）糖尿病模型，運用Morris水迷宮測試其行為學改變，用免疫組化和RTPCR技術觀察海馬神經元ChAT及其mRNA表達變化，并用AngⅣ進行干預，進一步觀察AngⅣ對糖尿病大鼠海馬ChAT表達及其認知功能改變的影響，探討糖尿病認知功能障礙可能的發病機制。

1 材料與方法

1.1 材料

STZ（美國Alexis公司）；血糖儀（德國羅氏公司）；大鼠腦立體定位儀（美國Stoelting公司）；Morris水迷宮及水迷宮記錄分析系統（中國醫學科學院藥物研究所研制）；AngⅣ（購自美國鳳凰藥業有限公司）；兔抗大鼠膽堿乙酰轉移酶多克隆抗體（購自美國UCL公司）；RTPCR試劑盒（購自美國TaKaRa公司）；Trizol（上海生工生物工程技術服務有限公司）；引物合成：賽百盛基因工程有限公司。

1.2 動物分組與處理

SD雄性大鼠38只，8～10周齡，體重180～220 g，購自重慶醫科大學動物實驗中心。動物適應喂養1 w后，隨機分為正常對照組10只、糖尿病組14只和糖尿病+AngⅣ組14只。建立STZ糖尿病模型，大鼠禁食12 h，糖尿病組和糖尿病+AngⅣ組按60 mg／kg劑量腹腔一次注射1%STZ（溶于pH4.2，0.1 mol／L檸檬酸檸檬酸鈉緩沖液），正常對照組注射等量緩沖液。血糖穩定3 d后，尾靜脈隨機血糖＞16.67 mmol／L認為糖尿病模型建立成功。成模后第11周，各組均進行水迷宮測試，之后糖尿病+AngⅣ組側腦室每天注射AngⅣ5 nmol（1 nmol/μl），糖尿病組和正常對照組注射等體積的生理鹽水，持續1 w，所有實驗大鼠再次進行水迷宮測試。實驗終點糖尿病組大鼠死亡2只，糖尿病+AngⅣ組大鼠死亡3只。

1.3 Morris水迷宮測試

Morris水迷宮操作系統，包括直徑150 cm的圓形水池，高15 cm、直徑10 cm的平臺，平臺表面低于水面2 cm，水迷宮記錄分析系統。糖尿病模型建模成功后第11周，訓練3 d，第4天進行隱藏平臺獲得實驗，分析潛伏期，考察學習能力。第5天撤去平臺進行空間搜索實驗去除平臺觀察2 min內大鼠在中心區域停留時間百分比以及通過原平臺的次數，測試記憶能力。干預1 w再次重復上述實驗。

1.4 AngⅣ干預

成模后第11周，各組大鼠水迷宮測試完畢即行AngⅣ干預。大鼠經4%水合氯醛（10 ml／kg）腹腔注射麻醉后，固定于腦立體定位儀，沿顱頂正中線剪開頭皮暴露顱骨，大鼠側腦室穿刺坐標〔2〕：前囟后1.0 mm，右1.5 mm，深3.5 mm。微型電鉆沿此穿刺點鉆孔。將帶內芯的不銹鋼套管（外徑0.9 mm，內徑0.5 mm）垂直插入側腦室內，牙托粉黏合固定套管，凝固后縫合傷口。術后大鼠分籠飼養并予青霉素抗炎。導管置入后第4天開始進行側腦室注射，生理鹽水將AngⅣ配成所需濃度(1 nmol／μl)，微量注射器3 min內將5 μl AngⅣ溶液勻速注入側腦室（AngⅣ組），留針1 min，每天給藥1次。正常對照組和糖尿病組注射等體積生理鹽水，持續7 d。

1.5 免疫組化

采用SP法免疫組織化學染色。 處死大鼠，1%多聚甲醛心臟灌注取腦，石蠟包埋連續冠狀切片，根據試劑盒說明檢測ChAT在各組大鼠海馬的表達。每只標本隨機取1張切片，每張切片高倍鏡（×400）下隨機選擇3 個視野的海馬區域，采用ImagePro Plus6.0軟件測定該區域ChAT陽性染色神經元的平均光密度值。

1.6 RTPCR法

大鼠斷頭，低溫下快速取出海馬組織，液氮凍存。稱取50 mg海馬組織，提取總RNA，進行RTPCR，ChAT引物序列為5'ACCTCGTCTGTGGAGTTTGCG3'，5' TCAAGATTGCTTGGCTTGGTT3'。條件：94℃預變性2 min；94℃30 s；57℃退火30 s；72℃延伸30 s，26個循環；72℃再延伸10 min；4℃保存。取PCR產物5 μl進行瓊脂糖凝膠電泳鑒定，照相記錄。凝膠成像分析系統掃描RTPCR電泳結果，用Quantity One軟件測定Volumn值，計算ChAT／βactin比值。

1.7 統計學處理

數據用x±s表示，均經過方差齊性檢驗和正態性檢驗，采用SPSS10.0統計分析軟件進行方差分析。

2 結 果

2.1 隱藏平臺獲得實驗

糖尿病組潛伏期增加，與正常對照組比較差異有顯著性（P＜0.05）。糖尿病+AngⅣ組較糖尿病組潛伏期明顯縮短（P＜0.05），較正常對照組稍延長，但無統計學意義（P＞0.05），見表1。表1 大鼠空間搜索實驗/隱蔽平臺搜索實驗結果(略)

2.2 空間搜索實驗

糖尿病組與正常對照組相比，中心區停留時間百分比和通過原平臺位置次數較明顯下降（P＜0.05）。上述參數，糖尿病+AngⅣ組較糖尿病組明顯增加（P＜0.05），與正常對照組比較無明顯差異（P＞0.05），見表2。

2.3 免疫組化結果

糖尿病組海馬ChAT陽性神經元平均光密度明顯降低，與正常對照組相比有顯著性差異（P＜0.05）。糖尿病+AngⅣ組與糖尿病組比較，上述指標明顯增加（P＜0.05），但與正常對照組比較無明顯差異（P>0.05）。見表2，圖1。

2.4 ChAT mRNA的表達

糖尿病組ChAT mRNA表達水平明顯下降（P＜0.05），經AngⅣ干預后可顯著增加ChAT mRNA表達水平（P＜0.05），差異具有統計學意義。見表2，圖2。表2 各組大鼠海馬ChAT蛋白和mRNA表達結果(略)

3 討 論

糖尿病認知功能障礙最早在上世紀20年代提出，隨后很多學者也證實糖尿病患者確實存在明顯的獲得性的認知功能缺陷，這種認知缺陷在1型糖尿病和2型糖尿病都可以發生，主要表現為學習和記憶功能的減退。本實驗采用STZ糖尿病模型，結果提示糖尿病大鼠在成模11 w出現學習能力減退；記憶能力也顯著受損，與文獻報道相一致〔3〕。本實驗通過免疫組化和RTPCR方法檢測糖尿病大鼠海馬ChAT的表達，結果提示ChAT表達的顯著降低導致糖尿病認知功能障礙發生。

血管緊張素Ⅳ（AngⅣ）是血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）C末端的6肽片段，由AngⅡ在氨基肽酶B的作用下裂解而成，AngⅣ在體內通過與其特異性的高親和力受體AT4結合發揮作用。近年來有系列研究發現，AngⅣ不僅可以在被動回避反應實驗中增強記憶和學習，而且可以預防由美加明、東莨菪堿、乙醇和缺血導致的記憶缺失〔4～6〕。本研究表明AngⅣ對糖尿病認知功能障礙有明顯的改善作用。目前AngⅣ改善認知功能的機制仍不明確，推測其可能的途徑有：①易化海馬的長時程增強（LTP）效應；②A抑制海馬神經元凋亡；③改善腦灌注〔7〕。而且我們的實驗還發現在給予AngⅣ干預以后，糖尿病大鼠海馬的ChAT的蛋白表達水平和mRNA表達水平都明顯增加，與其Morris水迷宮成績改善呈顯著正相關，因此我們認為AngⅣ增加海馬的ChAT表達水平，促進乙酰膽堿的合成，可能是其改善糖尿病認知功能障礙的又一重要途徑，這為臨床防治糖尿病認知功能障礙提供了新的思路。

然而，糖尿病認知功能障礙的發病機制極其復雜，RAS系統各成員與糖尿病認知功能的關系仍未完全闡明，繼續深入的研究二者的關系將為糖尿病慢性并發癥的防治提供堅實的實驗基礎，使更多的糖尿病患者受益。

參考文獻

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3 Biessels GJ，Kamal A，Ramakers GM，et al.Place learning and hippocampal synaptic plasticity in streptozotocininduced diabetic rats〔J〕. Diabetes，1996；45(9):125966.

4 Tchekalarova J，Kambourova T，Georgiev V.Interaction between angiotensin IV and adenosine A(1) receptor related drugs in passive avoidance conditioning in rats〔J〕.Behav Brain Res，2001；123(1):1136.

5 Albiston AL，Pederson ES，Burns P，et al.Attenuation of scopolamineinduced learning deficits by LVVhemorphin7 in rats in the passive avoidance and water maze paradigms〔J〕.Behav Brain Res，2004；154(1):23943.

第5篇：醫學影像技術技能范文

[關鍵詞] 依達拉奉;血管性癡呆;學習記憶;Chat;NR2B

[中圖分類號] R965[文獻標識碼]A [文章編號]1673-7210(2010)02(c)-023-02

Effect of Edaravone on learning, memory and expressions of hippocampal Chat and NR2B in rats with vascular dementia

LI Yanbo, ZHANG Shenglin

(Department of Geriatrics, the First Clinical Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)

[Abstract] Objective: To research the effect of Edaravone on learning, memory and expressions of hippocampal of Chat and NR2B in rats with vascular dementia (VD). Methods: VD rat models were established by two-vessel occlusion and Sodium Nitroprusside depressurization. Morris test was performed to detect the cognition of rats. Immunohistochemistry was used to observe the expressions of Chat and NR2B in hippocamp. Results: The learning and memory of VD group (group B) were higher compared with sham-operation group (group A), Edaravone group (group C) and preventive treatment group (group D), and the expressions of Chat and NR2B were decreased in hippocamp of group B (P0.05). Conclusion: Edaravone improves the learning and memory in VD rats, its effects may result from the increase in hippocampal Chat and NR2B expression, we can also conclude that Edaravone has a preventive effect on cognitive decline in rats.

[Key words] Edaravone; VD; Learning and memory; Chat; NR2B

依達拉奉是一種新型的腦保護藥,具有清除自由基、抗細胞凋亡和神經保護作用[1]。臨床研究結果表明,依達拉奉在腦梗死中有顯著的神經保護作用[2-3]。血管性疾呆(VD)是一組由于缺血或出血性的腦血管病及全腦缺血低氧引起的認知功能障礙綜合征。本文通過觀察依達拉奉對VD大鼠海馬Chat、NR2B表達的影響,研究依達拉奉的預防及治療作用,為VD的治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1動物分組及模型制備

實驗動物由山西醫科大學實驗動物中心提供,選用雄性Wistar大鼠36只,體重200～250 g,適應性飼養2周,采用“兩血管阻斷+硝普鈉降壓法”[4]制備VD大鼠模型,B組(VD組)、C組(依達拉奉治療組)、D組(預防治療組)行雙側頸總動脈反復缺血-再灌注2次,每次10 min,同時在缺血-再灌注前給予硝普鈉2.5 mg/kg腹腔注射,A組僅暴露雙側頸總動脈而不結扎,且不注射硝普鈉。

1.2 給藥方法

C組大鼠于術后第7天給予依達拉奉皮下注射3 mg/kg,D組于造模麻醉前給予同等劑量的依達拉奉,每天1次給藥,共20 d;A組與B組給予等量生理鹽水皮下注射。

1.3 學習記憶能力的測定

根據Morris水迷宮實驗進行大鼠學習記憶功能測定,歷時5 d,前4 d記錄在2 min內找到并爬上平臺的時間為大鼠的逃避潛伏期,即學習成績;第5天撤掉平臺后,記錄大鼠穿越平臺的次數以測試其記憶能力。

1.4 制備組織切片

各組動物分別于造模后第30天處死,灌洗固定后剝取海馬組織,石蠟包埋,脫蠟,應用免疫組化方法制片。

1.5灰度值分析

各組取海馬CA1、CA3區各10個測試點,求平均值進行分析。

1.6 統計學處理

數據以均數±標準差(x±s)表示,然后運用SPSS 13.5統計軟件進行單因素方差分析,顯著性檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 水迷宮實驗結果

見表1。

2.1.1定位航行實驗結果B組逃避潛伏期均較A、C、D組延長(P

2.1.2 空間搜索實驗結果B組穿越平臺次數較A、C、D組減少(P

2.2 圖像灰度值分析

與A組比較,B組海馬CA1、CA3區的Chat及NR2B表達明顯,差異有高度統計學意義(P

表2 各組大鼠海馬CA1、CA3區Chat、NR2B表達(x±s)

與A組比較,■P

3討論

本實驗結果表明,B組大鼠逃避潛伏期明顯延長,而C組與D組較B組均縮短,且D組與A組比較,差異無統計學意義,說明依達拉奉能夠改善VD大鼠的認知,同時說明依達拉奉有預防VD發生的作用。其機制可能與依達拉奉能夠抑制脂質過氧化、清除過量自由基、保護細胞線粒體、阻止自由基釋放而引起的遲發型的組織損害有關[5]。

Chat是膽堿能神經元的特殊標志,Chat免疫反應陽性神經元減少與大鼠學習記憶障礙程度呈正相關[6]。本實驗發現,Chat蛋白在B組海馬區表達極少,可能是因為腦組織遭受自由基的氧化損傷,導致神經細胞凋亡。在C組與D組中其表達增加可能是因為依達拉奉清除過量生成的自由基保護細胞線粒體,抑制脂質過氧化作用和血管內皮細胞損傷[2],阻止了caspase-3的活化[7],提高了Bcl-2的表達[8],減少了缺血區神經細胞的凋亡。

NR2B是NMDA受體的調節亞單位,在學習和記憶中起關鍵作用[9]。腦缺血引起神經元去極化,導致谷氨酸(Glu)的大量釋放,Ca2+內流主要由谷氨酸受體的一種亞型NMDA受體通道介導,Ca2+超載造成神經元損傷,這就是Glu對神經元的興奮毒性損傷[10]。本研究中,VD大鼠海馬NR2B表達減少的機制可能與海馬缺血、低氧致神經元死亡或結構受損有關,也可能與神經元低代謝影響神經傳遞有關,而經依達拉奉干預后NR2B表達增加可能與依達拉奉能夠抑制谷氨酸釋放[11],進而改善局部腦血流量和腦微循環及腦能量代謝有關。

本實驗發現,C組Chat及NR2B表達與D組比較,差異無統計學意義,但水迷宮實驗中D組較C組學習記憶能力提高,可能仍有其他機制的影響,有待于進一步研究。

[參考文獻]

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[10]Choi DW. Calcium: still center-stage in hypoxic-ischemic neuronal death [J]. J Trend Neuro,1995,18(2):58-60.

第6篇：醫學影像技術技能范文

【關鍵詞】 紫草素;D-半乳糖;老年性癡呆模型

老年性癡呆(AD)是一種嚴重危害老年人群身心健康的慢性神經退行性疾病,其發生機制與自由基過載造成的氧化應激反應密切相關,后者可引起癡呆模型動物腦內脂質過氧化產物丙二醛(MDA)含量增高、超氧化物歧化酶(SOD)水平降低,是AD發生的重要影響因素。新疆軟紫草有效成分紫草素具有體外抗氧化及抗衰老等多種藥理活性,對氧化應激損傷具有較好的拮抗作用,但其是否具有腦內抗氧化及改善AD患者學習記憶的作用尚未見明確報道。本研究采用AD大鼠模型,通過觀察其腦內MDA和SOD含量的變化,初步探討紫草素對AD的防治作用。

1 材料與方法

1.1 動物及分組 30只雄性Wistar大鼠,體質量230~270 g,購自新疆實驗動物中心,合格證號XJLA-2008-04。動物

基金項目:石河子大學高層次人才科研基金項目(項目編號:RCZX200664)

作者單位:721000寶雞市人民醫院(景富春);石河子大學藥學院藥本05級1班(高建波 劉冬);石河子大學藥學院藥理系(許玉華 王振華); 石河子大學藥學院中藥系(譚勇)

被隨機分為對照組、模型組、陽性藥組、紫草素高劑量組和紫草素低劑量組, 5只/組。

1.2 藥物和試劑 D-半乳糖(批號080120)和考馬斯亮藍G250購自上海藍季公司、超氧化物歧化酶(SOD,批號20080515)及丙二醛(MDA,批號20080407)試劑盒為南京建成生物工程研究所提供,軟紫草有效成分紫草素(20070806)購自中國生物制品檢定所,其他試劑均為國產分析純,水為超純水。

1.3 儀器 Thermo 多功能酶標儀,Morris水迷宮(中國醫學科學院藥物研究所),德國IAK-R104組織勻漿機,湖南凱達TGL20M高速冷凍離心機。

1.4 造模及給藥方法 模型組、陽性藥組、紫草素高劑量組和紫草素低劑量組大鼠均腹腔注射D-半乳糖300 mg/(kg•d),對照組同樣方法注射0.9%氯化鈉注射液2 ml/(kg•d),連續6周。于第6周末次給藥結束后開始進行水迷宮實驗,將篩選合格動物納入后續實驗,水迷宮試驗方法參照文獻[1]。其中,陽性藥組給予灌胃給藥哈伯因0.008 mg/100(g•d),紫草素高劑量組和低劑量組分別灌胃給藥紫草素0.7 mg 和0.35 mg/100 g•d,連續1周。對照組及模型組灌胃給藥等容積生理鹽水。給藥結束后先行水迷宮實驗,然后進行腦勻漿SOD和MDA測定。

1.5 腦勻漿SOD和MDA含量測定 對照組、模型組、陽性藥組、紫草素高劑量組和低劑量組均于末次給藥后迅速置0℃冰面斷頭處死,冰浴下快速勻漿,繼以低溫高速離心,設定速度3000 r/min,離心時間10 min。取上清液備用。SOD和MDA試劑的配制均參照試劑盒相應說明書。腦勻漿中蛋白含量測定用考馬斯亮藍G250法。

1.6 統計學方法 所獲數據均采用x±s表示,用SPSS for Windows 10.0統計軟件作單因素方差分析(ANOVA),以P

2 結果

2.1 紫草素對D半乳糖損傷所致老年性癡呆模型大鼠的行為學影響 見表1。與對照組大鼠相比,模型組大鼠在Morris水迷宮中的游泳持續時間明顯延長,搜索策略多為隨機式或邊緣式。兩種指標的組間差異具有統計學意義(P

表1

紫草素D半乳糖致老年性癡呆模型大鼠在Morris水迷宮中的游泳時間(x±s,n=30)

組別劑量(mg/kg)游泳時間(s)

Day1Day2Day3Day4Day5

空白2.0092.71±22.6771.81±43.0654.42±45.0928.01±25.3425.22±25.46

模型150.00106.33±36.992.23±39.94*84.24±43.84**52.78±48.27*48.74±46.40*

陽性藥0.0898.56±27.7281.76±41.1266.92±41.1140.91±24.6531.47±27.52

紫草素高劑量7.00102.85±29.5483.23±38.6172.67±39.8842.35±26.4337.08±23.32

紫草素低劑量3.50104.53±30.6386.30±45.2382.79±40.3751.33±27.9047.55±33.12

注:與空白組比較,*P

2.2 紫草素對D半乳糖損傷所致老年性癡呆模型大鼠腦勻漿中SOD和MDA含量的影響 見表2。模型組大鼠各時間點的SOD濃度均明顯低于對照組,而陽性藥組和紫草素高劑量組在各時間點則顯著高于模型組,兩兩比較差異具有統計學意義(P

表2

紫草素對D半乳糖致老年性癡呆模型大鼠腦勻漿中SOD和 MDA含量的影響(x±s,n=6)

組別劑量(mg/kg)SOD(NU/mg•prot)MDA(nmol/mg•prot)

空白2.00471.98±12.16**49.74±11.53**

模型2.00439.92±8.1286.82±18.47

陽性藥0.08467.18±10.74**59.87±6.69*

紫草素高劑量7.00458.55±7.30*59.31±16.40*

紫草素低劑量3.50451.78±0.0661.55±7.90*

注:與模型組比較,*P

與SOD不同,MDA的濃度在各組呈現出相反的變化,其差異亦有統計學意義(P

3 討論

老年性癡呆(AD)是一種嚴重危害老年人群身心健康的慢性神經退行性疾病。近年來,隨著全球人口老齡化步伐的加快,該病的患病率呈現上升趨勢。據國內外有關調查顯示,西方發達國家60歲以上老年人的癡呆患病率達2.3%~11.9%,我國在北京、上海、西安和成都等四個中心城市對年齡≥55歲人口進行的調查表明癡呆患病率為2.7%~7.3%。

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研究表明,AD的發生與多種因素導致腦內學習記憶相關神經元損傷有關[2],其中氧化脅迫反應是主要病理改變之一。氧化脅迫可引起癡呆模型動物腦組織膽堿能神經和多巴胺能神經功能受損,膽堿乙酰化酶活性降低,單胺氧化酶活性(MAO-B)升高,造成腦內與學習記憶和認知功能相關的神經遞質乙酰膽堿(ACh)及多巴胺等的水平降低。還可導致衰老神經元胞漿中脂質過氧化產物丙二醛(MDA)的含量明顯增高,后者呈帽狀結構圍繞脂褐素沉積,并成為老年斑的組成部分。氧化脅迫尚能造成其頂下小葉中表達超氧化物歧化酶(SOD)及在海馬中表達谷光甘肽(GSH)的mRNA基因轉錄水平降低,促進了神經元變性和癡呆的發生。

新疆軟紫草提取物具有抗氧化和抗衰老等多種藥理活性[3],其抗氧化能力相當于2,6-二叔丁基對甲酚的42%和維生素C的35.5 %[4],對D-半乳糖所致急性氧化性肝損傷具保護作用,對超氧陰離子(O-2)、羥自由基(•OH)和單線態氧(1O2)等有較強清除能力,對氧化脅迫損傷具有較好的拮抗作用[5],同時尚可延長果蠅壽命并呈現出一定的量效關系[6]。這些研究結果表明,軟紫草可能具有抗AD患者神經元氧化脅迫損傷作用。

本研究發現紫草素具有一定的抗腦內氧化脅迫作用,能明顯改善D半乳糖癡呆模型大鼠腦勻漿中的SOD 和MDA的活性及含量變化,改善其學習記憶能力,提示以紫草素為研究靶點有可能開發出新的抗老年癡呆藥物,開展紫草素抗老年性癡呆作用研究具有重要基礎及臨床研究價值。

參 考 文 獻

[1] 叢偉紅,劉建勛,徐立. 腦維康對D半乳糖致腦老化模型大鼠學習記憶的影響. 中藥藥理與臨床,2007,23(5):155.

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第7篇：醫學影像技術技能范文

【摘要】

目的 探討高脂膳食對學習記憶及突觸可塑性的影響，為合理膳食預防腦老化提供科學依據。方法 雄性ICR小鼠分為4組，即高脂膳食組、腦老化組、模型組、普通對照組，每組10只。以每天D半乳糖100 mg/kg皮下注射法制備腦老化模型，實驗干預期共9 w。以Morris水迷宮測試小鼠空間記憶和學習能力，流式細胞術測定皮層海馬神經元突觸體數量，熒光偏振法測定突觸體膜流動性。結果 ①水迷宮實驗中，腦老化組小鼠的逃避潛伏期 (EL) 明顯大于普通對照組小鼠(P0.05)，高脂膳食組與普通對照組小鼠的EL無顯著差異(P>0.05)。②突觸體數量：腦老化組和模型組小鼠低于非腦老化組(高脂膳食組和普通對照組，P0.05)，但高脂膳食組顯著低于普通對照組(P

【關鍵詞】 高脂膳食；腦老化；突觸可塑性；膜流動性

【Abstract】 Objective To examine the effects of high fat diet on learning as well as on synaptic plasticity and afford scientific evidence to rational diet and prevent brain aging. Methods Forty male ICR mice were randomly pided into the high fat diet only， the Dgalactoseinduced brain aging， brain aging plus high fat diet， and normal control groups. Mice were given 100 mg·kg-1·d-1 subcutaneous injection of Dgalactose to prepare brain aging model for 9 w. Morris water maze (MWM) test was employed to determine their spatial learning and memory abilities. Flow cytometry (FCM) was used to analyze the amount of hippocampal synaptosomes. Membrane fluidity of synaptosomes was measured by fluorescence polarization technique. Results (1)In Morris water maze test， brain aging mice showed a significanly longer escape latency (EL) than that of the normal control mice (P＜0.05). There was no statistical difference in EL between brain aging mice plus high fat diet and brain aging mice groups (P＞0.05)， and between the control and high fat diet groups (P＞0.05). (2)Number of synaptosomes: The number of synaptosomes in brain aging mice and brain aging mice plus high fat diet groups were less than those in nonbrain aging mice (the high fat diet and the control mice groups) (P＜0.05). There were no statistical difference in the number of synaptosomes between brain aging mice plus high fat diet and brain aging mice groups(P＞0.05). The high fat diet group was less than that of the normal control group (P＜0.05). (3)Membrane fluidity of synaptosomes: The fluidity of membrane in brain aging group and brain aging mice plus high fat diet group were less than that in the control group (P＜0.05). There were no statistical difference between brain aging mice plus high fat diet groups and brain aging mice group (P＞0.05). The high fat diet group was less than that of the normal control group (P＜0.05). Conclusions High fat diet can reduce the number and the fluidity of hippocampal synaptosomes in mice. But high fat diet has no significant influence on learning and has no significant synergism effects on the Dgalactoseinduced brain aging.

【Key words】 High fat diet; Brain aging; Synaptic plasticity; Membrane fluidity

大腦皮層和海馬是學習記憶功能相關腦區，研究發現，衰老時該區域突觸形態結構和數量發生變化，包括突觸密度減少、突觸界面曲率降低、間隙寬度加大和變寬、突觸后致密物質變薄、突觸體膜的流動性降低以及突觸素含量減少等，這些變化可引起學習記憶功能障礙〔1〕 。阿爾茨海默病(AD)常被認為是一種加速的腦老化，患者學習記憶功能障礙的機制之一是海馬神經元的突觸丟失和突觸可塑性的變化〔2〕。膳食脂肪的攝入量與認知功能及某些神經系統疾患密切相關，例如高脂膳食增加AD和其他類型癡呆發生的危險性〔3，4〕。本研究以D半乳糖腦老化小鼠模型為陽性對照，探討髙脂膳食對大腦突觸可塑性相關指標的影響，為合理膳食抗腦老化提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及其處理

3月齡清潔級雄性ICR小鼠40只，體重30～45 g，由首都醫科大學實驗動物中心提供，自由攝食和飲水。適應性飼養1 w后，將小鼠按體重隨機分為4組，即腦老化組、模型組、高脂膳食組、普通對照組，每組10只。腦老化模型構建：以D半乳糖100 mg/kg 頸背部皮下注射，1次/d，連續9 w。高脂膳食干預：相關小鼠飼以特制高脂飼料，配方為基礎飼料79%、豬油10%、蛋黃粉10%、膽固醇1%。其余飼養條件同普通對照鼠。

1.2 Morris水迷宮實驗

完成9 w實驗干預后進行Morris水迷宮（MWM）實驗以檢測小鼠的空間學習記憶能力，具體方法見文獻〔5〕，共進行5 d，其間各組小鼠保持原干預措施不變。

1.3 突觸體流式計數

參照文獻〔6〕，稍作改動。小鼠斷頭處死，迅速取大腦皮層及海馬，清潔稱重，用預冷的0.32 mol/L蔗糖液（pH7.0）制成10%勻漿，離心10 min，取上清液鋪加在1.2 mol/L冷蔗糖液表面，50 000 r/min離心15 min，小心取出突觸體層帶，按1∶3的比例用0.32 mol/L冷蔗糖液稀釋。稀釋液緩慢鋪加在0.8 mol/L冷蔗糖液表面，50 000 r/min離心15 min，棄上清，沉淀即為突觸體。用Na介質（NaPSS）緩沖液1 ml懸浮突觸體，考馬斯亮藍法（Bradford）測定突觸體懸液蛋白質濃度，調整蛋白濃度在120～200 mg/L，4°C保存。取突觸體懸液100 μl，以突觸泡膜素為一抗，異硫氰酸熒光素（FITC）標記的羊抗鼠單克隆抗體為二抗，對突觸體進行免疫熒光間接染色，基本步驟為：固定液4℃固定2 h，一抗工作液4℃孵育1.5 h，FITC熒光標記二抗工作液4℃孵育1.5 h。洗滌液洗滌2次，離心5 min，適量磷酸鹽緩沖液（PBS）重懸浮，流式細胞儀(FCM)計數。

1.4 突觸體膜流動性測定

采用熒光偏振法〔7〕。取突觸體懸液500 μl，加入等體積20 μmol/L熒光探針1，62苯基1，3，5乙三烯（DPH）工作液，37℃避光孵育15 min，4℃，13 000 r/min離心2 min，沉淀重懸浮于NaPSS液中，37℃均衡10 min，用熒光分光光度計測熒光偏振強度。激發光波長360 nm，發射光波長430 nm。先用無標記對照突觸體懸液測定I90°，0°和I90°，90°的熒光光度值，計算熒光偏振校正因子，然后測樣品I90°，0°和I90°，90°，計算樣品突觸體膜偏振度和膜黏滯度η，蛋白濃度測定采用Bradford法。

1.5 統計學處理 采用SPSS12.0統計軟件進行分析，數據以x±s表示，多組均數間比較采用OnewayANOVA分析，兩兩比較采用最小顯著差法(LSD)檢驗。

2 結果

2.1 突觸體計數和突觸體膜流動性

腦老化組和模型組突觸體數量顯著低于非腦老化組(高脂膳食組和普通對照組，P0.05)。高脂膳食組突觸體數量顯著低于普通對照組(P＜0.05)。腦老化組及模型組突觸體膜黏滯度顯著高于普通對照組(P0.05)。高脂膳食組顯著高于普通對照組(P

2.2 MWM結果

腦老化組小鼠的逃避潛伏期（EL）顯著高于普通對照組(P0.05)。

3 討論

腦組織由于代謝水平高而自身抗氧化能力弱，易受活性氧自由基損害，根據老化的自由基理論，通過注射D半乳糖可使動物產生過量氧自由基而誘導發生腦老化，以此形成的腦老化動物模型已被用于老化和抗老化研究。本研究以D半乳糖誘導的腦老化小鼠為實驗模型，通過Morris水迷宮測試，證實其學習記憶能力明顯受損，表明腦老化模型建立成功。但模型組EL與腦老化組無差異，表明高脂膳食并未使腦老化小鼠學習能力進一步受損。高脂膳食對正常小鼠的學習能力也無明顯影響。這與有關文獻報道〔8〕的結果不一致，分析可能與本研究所采用的高脂飼料中添加了蛋黃粉有關。蛋黃粉中含有豐富的卵磷脂和維生素A等腦營養成分。

本研究發現，D半乳糖誘導的腦老化小鼠大腦神經元突觸體形成數量減少，突觸體膜流動性降低，表明該腦老化模型小鼠有神經突觸的丟失，突觸細微形態結構的變化和突觸功能下降。腦老化的一個基本表現是學習記憶能力的衰退，學習記憶的基礎是神經系統的高度可塑性。突觸是實現腦功能的關鍵部位，其可塑性代表了整個神經回路的可塑性。突觸可塑性包括突觸傳遞可塑性、突觸發育可塑性和突觸形態（包括突觸丟失和新的突觸聯系的形成）的可塑性〔9，10〕。本研究所檢測的小鼠的皮層和海馬的突觸體數量和突觸體膜流動性均為突觸可塑性相關指標〔9，10〕。突觸體形成的數量一定程度上可反映神經元突觸連接的多少，突觸體膜的流動性則可反映突觸傳遞功能。老年鼠大腦突觸體膜膽固醇含量較年輕鼠顯著增高〔11〕，而膜中膽固醇含量增加，特別是膽固醇與磷脂比例增加，可引起細胞膜流動性下降〔12〕。皮層和海馬神經細胞膜的膽固醇含量較其他腦區高。因此，在腦老化過程中，皮層、海馬神經元的膜流動性最易受到影響。本研究采用的D半乳糖腦老化模型，主要基于脂質過氧化損傷機制，研究表明同樣能夠造成大腦突觸體形成數量減少和突觸體膜流動性下降，但高脂膳食并未使D半乳糖的這種不良效應進一步加重，原因可能在于高脂膳食本身也是主要通過引發過氧化反應而損害腦功能，兩種因素通過同一種機制影響突觸可塑性，使其協同效應相對不明顯。

本研究發現，盡管高脂膳食并未明顯影響正常小鼠的學習記憶能力，但卻已導致正常小鼠突觸體數量衰減和突觸體膜流動性下降，說明高脂膳食對突觸可塑性有確實的影響，另一方面說明學習記憶能力并不單純依賴于突觸可塑性。本文關于高脂膳食對腦老化小鼠和正常小鼠突觸可塑性影響的研究結果提示，預防腦老化不僅是在老年期，更根本的措施應該是在各個年齡階段均保持良好飲食習慣，避免長期高脂膳食。

參考文獻

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8 Winocur G，Greenwood C E.Studies of the effects of high fat diets on cognitive function in a rat model〔J〕.Neurobiol Aging，2005；26(11)：469.

9 Farmer J，Zhao X，van Praag H，et al.Effects of voluntary exercise on synaptic plasticity and gene expression in the dentate gyrus of adult male SpragueDawley rats in vivo〔J〕.Neuroscience，2004；124(1)：719.

10 Vaynman S，Ying Z，GomezPinilla F.Hippocampal BDNF mediates the efficacy of exercise on synaptic plasticity and cognition〔J〕.Eur J Neurosci，2004；20(10)：258090.

第8篇：醫學影像技術技能范文

慢性支氣管炎(CB)是一種嚴重危害人類健康的常見病，隨著世界人口老齡化的到來，臨床上CB的患病率逐年升高，早期積極防治具有重要意義。野為清熱類藥，具有疏風清熱、消腫解毒、抗感染、抗病毒的功效，在全國各地(包括甘肅在內)均有出產。本實驗旨在探討野提取物對CB大鼠免疫功能及病理形態學的影響，通過實驗揭示其效應及其部分作用機理，為野的臨床廣泛應用提供實驗依據。

材料與方法

藥物與試劑：精制脂多糖，美國Sigma公司產品；野提取物，野購自甘肅中醫學院附屬醫院，提取物由甘肅中醫學院中藥制劑教研室協助制備；SOD測試盒，南京建成生物工程研究所提供(批號20080424)；其他試劑均為分析純級。

實驗儀器：電子天平，電子分析天平(上海精密科學儀器有限公司)，VIS-7220分光光度儀(北京瑞利分析儀器廠)，HH.SH.CV2型電熱恒溫水浴鍋(濟南醫療器械廠)。

實驗動物：SPF級Wistar大鼠，48只，體重200±20g，雌雄各半，由甘肅中醫學院科研實驗中心提供。

分組及模型制備：48只Wistar大鼠，隨機分為空白對照組，CB慢性支氣管炎模型組，喘息靈對照組，野提取物低、中、高劑量組，每組8只。各組大鼠腹腔注射烏拉坦(1.4g/kg)麻醉后，仰臥位固定于操作臺，常規消毒，縱向切開頸部，分離皮下，暴露氣管，4號針頭穿刺氣管，除了正常對照組氣管注入液以生理鹽水代替內毒素外，其余注入1g/L的脂多糖200μl建立CB模型［1,2］；第8天起，正常對照組、CB模型組每日灌服等體積生理鹽水，中藥對照組灌服喘息靈膠囊0.13g/（kg•日），野低、中、高劑量組分別灌胃野提取物0.7、1.4，2、8g/（kg•日），共21天。

觀察指標：①脾臟指數和胸腺指數檢測：各組動物按上述方法給藥后，第22天各組大鼠稱重后處死，解剖，取脾臟、胸腺，用生理鹽水洗凈，吸干，稱重，以臟器濕重(mg/g)表示脾臟指數和胸腺指數。②血清及肺組織勻漿的制備：各組動物按上述方法給藥后，第22天各組大鼠股動脈取血分離血清待檢。③用黃嘌呤氧化酶法測定各組大鼠血清及組織中的SOD水平。

結 果

野提取物對大鼠脾臟指數、胸腺指數的影響：模型組脾臟指數較空白對照組下降明顯(P＜0.05)，野中、高劑量組脾臟指數比慢性支氣管炎模型組大鼠明顯升高(P＜0.05)，且高劑量組脾臟指數與低劑量組比較有顯著差異(P＜0.05)；胸腺指數各組間比較無顯著性差異。見表1。

野提取物對大鼠血清及肺組織SOD含量變化的影響：模型組大鼠血清和肺組織中的SOD活力與空白對照組比較明顯降低(P＜0.05)，除野提取物低劑量組外，其余各組與模型組比較，大鼠血清和肺組織中的SOD活力均明顯升高差異(P＜0.05)，且高劑量組與低劑量組比較有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

討 論

本研究CB模型制造成功，脾臟指數、胸腺指數是反映機體免疫功能最直接的指標。采用脂多糖復制的CB大鼠模型由于缺氧和慢性炎癥，細胞耗氧量明顯增加，體內產生大量自由基，其血清、肺組織中SOD活力顯著下降，脂質過氧化反應增強，而肺部慢性炎癥又使得機體抵抗力降低，抗自由基能力減弱，加劇了細胞壞死和組織損傷，致使病情進一步加重，肺功能進一步減退［1］。而經野提取物具有抗氧化作用，治療后，SOD水平顯著提高，表明野提取物確具有降低脂質過氧化反應，減輕氧自由基損傷，保護肺組織的作用。

本課題實驗證明調節免疫、降低脂質過氧化反應，改善肺組織的病理損傷均為野提取物減輕CB炎癥效應的機制。

第9篇：醫學影像技術技能范文

【關鍵詞】 瑞舒伐他汀；奧美沙坦酯；高血壓

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.30.094

高血壓多發于老年群體中， 為臨床常見心血管疾病。其致病原因為生活方式不健康、膳食結構不合理等。高血壓老年患者臨床癥狀不典型， 易受外界因素影響， 血壓較不穩定， 且易產生性低血壓[1]。相關研究指出， 高血壓患者心血管不良事件的發生率不僅與患者的血壓值密切相關， 且與血壓變異性的變化聯系緊密[2]。傳統治療高血壓多采用單藥口服治療， 效果較不理想。本研究選取本院收治的68例老年高血壓患者， 通過分組， 對比分析瑞舒伐他汀聯合奧美沙坦酯對老年高血壓患者內皮功能及血壓變異性的影響。結果報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2013年5月～2015年4月收治的68例老年高血壓患者， 隨機為對照組和研究組， 各34例。對照組男18例， 女16例， 平均年齡（69.4±7.5）歲；研究組男19例， 女15例， 平均年齡（69.5±7.6）歲。兩組患者一般資料比較， 差異無統計學意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 對照組患者予以奧美沙坦酯（福建天泉藥業股份有限公司， 國藥準字H20150016）口服治療， 1次/d， 20 mg/次。研究組患者在對照組基礎上予以瑞舒伐他汀（山東朗諾制藥有限公司， 國藥準字H20153194）口服治療， 1次/d， 10 mg/次。兩組患者均連續治療12周。

1. 3 觀察指標 比較兩組患者治療前后血壓變異性及內皮功能指標變化。包括內皮功能指標ET-1、NO。血壓變異性包括日間收縮壓標準差（dSSD）、日間舒張壓標準差（dDSD）、夜間收縮壓均數（nSBP）、夜間舒張壓均數（nDBP）、24 h SBP、24 h DBP。

1. 4 檢測方法 兩組患者均于清晨抽取5 ml空腹外周靜脈血， 予以抗凝及離心處理后， 取上清液置入EP管內低溫下保存。應用放射免疫法及化學比色法分別測定ET-1、NO水平。

1. 5 統計學方法 采用SPSS18.0統計學軟件進行數據統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P

2 結果

2. 1 兩組患者內皮功能指標變化比較 治療前， 兩組患者內皮功能指標比較， 差異無統計學意義（t=1.319、0.755， P>0.05）；治療后， 兩組患者內皮功能指標均顯著改善， 研究組ET-1及NO水平優于對照組（t=6.349、6.916， P

2. 2 兩組患者血壓變異性比較 治療前， 兩組患者血壓變異比較， 差異無統計學意義（t=0.779、0.182、0.304、0.526、0.759、0.412， P>0.05）；治療后， 兩組患者血壓變異性均優于治療前， 且研究組明顯優于對照組（t=3.022、3.162、3.353、2.038、2.022、2.135， P

3 討論

近年來， 隨著我國人口老齡化趨勢的發展及人們生活方式的轉變， 其發病率逐年增長。但相關研究顯示[3]， 我國老年高血壓患者的血壓控制達標率與治療率較低。目前， 高血壓的臨床治療目標為最大程度降低死亡率及心血管并發癥發生率。

相關研究表明[4]， 血壓波動幅度較大是引發腦卒中的獨立影響因素， 血壓波動上升， 腦卒中發生危險隨之增加， 同時還可引發內皮炎癥反應。因此控制高血壓患者血壓變異性水平可有效預防、減少心血管事件發生。ET-1與NO為血管內皮細胞功能重要標識， 由血管內皮細胞合成， 二者水平與高血壓形成與發展聯系密切。本研究對老年高血壓患者予以瑞舒伐他汀與奧美沙坦酯聯合治療， 結果顯示治療后， 兩組患者內皮功能指標均顯著改善， 研究組ET-1及NO水平優于對照組（P

綜上所述， 對老年高血壓患者予以瑞舒伐他汀與奧美沙坦酯聯合治療， 可顯著降低患者血壓變異性， 有效改善內皮功能， 在臨床治療中具有重要意義。

參考文獻

[1] 沈燕青， 徐欣， 陳浩.瑞舒伐他汀聯合奧美沙坦對老年高血壓患者內皮功能和血壓變異性的影響.中國老年學雜志， 2016， 36（3）：611-613.

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